一般社団法人
日本細胞生物学会Japan Society for Cell Biology

slot lysis protocol

author後藤 聡
所属慶應義塾大学医学部生理学教室
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Published2011-11-14Last Update2011-11-14
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概要・原理

plasmid constructionの際、mini prepなしでinsertをもつ大腸菌を、安価に選択できる方法です。 大腸菌をmini prep用にseedし、薄く濁ってきたところで一部サンプリング、遠心してペレットにし、lysozyme入りのバッファーに懸濁した後、あらかじめアガロースゲルのウエルにアプライしておいたリシスバッファー上に重層して泳動します。Insertをもつプラスミドが入ったサンプルは、ベクターのサイズよりも大きくなるので、そのサンプルのみmini prepして、実際のinsertを確認することになり、手間が省けます。

装置・器具・試薬

詳細  *それぞれの写真をクリックすると拡大します。

    • 集菌  E.coliが薄く増えてきたら、100 ulを取って15,000 rpm 1min supをアスピレート
    • あらかじめ泳動槽にセットしたゲルに、2 ulのLysis Bufferをアプライ
    • E.coli pptに5 ulのProtoplasting Bufferを加えてsuspend、そのままLysis Bufferの上に重層 (protoplasting Bufferはあらかじめ分注してはだめ。一枚のゲル分を素早く処理すること)
    • 最低のvoltで15 min泳動後、100 Vに上げて適当な位置まで泳動する。

工夫とコツ

参考文献